Peptidrenhet och HPLC – så tolkar du renhet i procent

HPLC (högpresterande vätskekromatografi) är standardmetoden för att bedöma peptidrenhet. Vid omvänd-fas-HPLC (RP-HPLC) separeras peptiden från orenheter på en kolonn, ofta av typen C18, med en gradient av vatten och acetonitril. Peptidbindningen absorberar UV-ljus, så peptider detekteras normalt vid cirka 214–220 nm.

Så läser du ett kromatogram

Den största toppen är peptiden. Mindre toppar är orenheter, till exempel felsekvenser eller oxiderade former. Renheten anges som arean för huvudtoppen delat med den totala arean (area-%).

Renhet är inte samma som peptidhalt

Ett frystorkat pulver innehåller även vatten och motjoner, till exempel TFA. Renhet i procent säger därför inte hur stor del av pulvret som är peptid. Renheten bekräftar heller inte identiteten, vilket görs med masspektrometri.

Vilken renhet behövs?

Det beror på användningen. Många känsliga analyser kräver hög renhet. Kontrollera alltid analysintyget: batchnummer, renhet, metod och datum. Läs mer i Vad är ett COA?